نمونه پرز جنینی (CVS)

 نمونه‌گیری از پرزهای جفتی یا Chorionic Villus Sampling (CVS)‎ به منظور تشخیص ژنتیکی در دوران جنینی انجام می‌پذیرد. برتری ویژه این شیوه در مقایسه با آمنیوسنتز این است که امکان انجام آن در سه ‌ماهه اول بارداری امکان‌پذیر می‌باشد. حال آنکه آمنیوسنتز معمولاً در سه‌ ماهه دوم بارداری انجام می‌گیرد. پرزهای جنینی، پرزهایی هستند که در صورت کشیدن با سرنگ، تکه تکه نمی شوند همچنین این پرزها حاوی یک رگ خونی می باشند. قسمت هایی از پرز که به صورت پفکی هستند چون پرز مادری بوده بایستی جدا گردد.

 

چگونگی انجام آزمایش CVS

هنگام مشاورۀ اولیه برای انجام آزمایش CVS، یک سونوگرافی انجام خواهد شد، تا سن و میزان رشد جنین و محل قرار گرفتن جفت مشخص شود. این کار برای تشخیص فرا رسیدن زودترین زمان مجاز برای انجام آزمایش است. آزمایش CVS معمولاً بین هفته‌های 11 تا 13 بارداری انجام می‌شود. اگر Rh مادر منفی باشد، پزشک پیش از شروع نمونه‌برداری در صورت نیاز و برای جلوگیری از اختلالات خونی مادر و جنین، پادتن Rh یا روگام (Rhogam) تزریق خواهد کرد.

 نمونه‌برداری از پرزهای جفتی به دو روش انجام می‌شود:

• نمونه‌برداری از واژن: برای جمع‌آوری پرزها از طریق واژن، ابزاری را از طریق واژن و دهانۀ رحم وارد رحم می‌کنند و بعد از طریق سونوگرافی همزمان، ابزار را به سمت جفت هدایت و از آن نمونه‌برداری می‌کنند.

• نمونه‌برداری از شکم: برای جمع‌آوری پرزها از طریق شکم، یک سوزن بلند و باریک را از طریق شکم با کنترل مداوم توسط سونوگرافی وارد رحم می‌کنند و نمونۀ جفت را از طریق آن خارج می‌کنند.

 

معیارهای پذیرش نمونه پرز جنینی

• حجم نمونه مناسب باید تقریبا 10 الی15 میلی گرم نمونه CVS باشد که حداقل 3 نانوگرم پرز جنینی حاصل شود.

• نمونه گیری در هفته 11-13 بارداری انجام شده باشد.

• نمونه CVS در لوله حاوی سرم فیزیولوژی یا نرمال سالین به صورت استریل فرستاده شود.

• نمونه نباید خونی باشد زیرا در صورت نیاز به شستشو ممکن است پرزهای جنینی نیز از بین بروند.

• نمونه CVS باید در محلول شناور باشد.

 

معیارهای رد نمونه پرز جنینی

• حداقل میزان پرز جنینی برای بدست آوردن میزان مناسبی از سلول جهت بررسی بیشتر 3 تا 4 نانوگرم می باشد و کمتر از آن قابل قبول نمی باشد.

• نمونه CVS نباید خشک، تکه تکه، پودر یا له شده باشد.

 

شرایط نگهداری نمونه پرز جنینی

• نمونه های گرفته شده بایستی سریعا به آزمایشگاه ژنتیک تحویل داده شود.

• در شرایط خاص می توانید نمونه را تا 24 ساعت در یخچال نگهداری نمایید (از یخ زدن و منجمد کردن نمونه جلوگیری شود).

 

نمونه آمنیون

آمنیوسنتز یک روش تشخیص قبل از تولد است که در آن مایع اطراف جنین برداشته شده و برای تشخیص ناهنجاریهای کروموزومی و ژنتیکی و نقائص لوله عصبی جنین به آزمایشگاه ژنتیک ارسال می گردد.کیسه آمنیوتیک پراز مایع در داخل رحم قرار داشته و جنین در آن بصور معلق زندگی می‌کند. سلولهای جنینی ، پروتئینها و ادرار جنینی هم در این مایع وجود دارد.

 

چگونگی  انجام عمل آمنیوسنتز

آمنیوسنتز عملی است که طی آن مقدار اندکی از مایع اطراف جنین (مایع آمنیوتیک) نمونه‌برداری می‌شود. آمنیوسنتز در مطب پزشک یا بیمارستان و معمولا در هفته‌های 15 تا 18 بارداری انجام می‌شود.

هنگام انجام آمنیوسنتز، پزشک از مانیتور سونوگرافی که تصویری روشن از وضعیت جنین در رحم و نیز مایع آمنیوتیک ارائه می‌دهد، استفاده می‌کند. پس از مشاهده و بررسی تصویر مزبور، وی سوزن بسیار باریکی را از راه شکم به درون رحم زن باردار فرو برده و حدود 20 میلی‌ لیتر از مایع آمنیوتیک را بیرون می‌کشد.

انجام این بخش از آمنیوسنتز تنها چند دقیقه به طول می‌انجامد. به گفته بسیاری از زنان باردار انجام آمنیوسنتز هیچ گونه صدمه و ناراحتی خاصی در بر ندارد. پس از تهیه مایع آمنیوتیک، می‌توان آزمایش‌های گوناگونی را برای تشخیص بسیاری از اختلالات کروموزومی و سایر بیماری‌ها بر روی آن انجام داد.

 

معیارهای پذیرش نمونه آمنیون

• نمونه آمنیون باید در سرنگ استریل بدون هرگونه ماده ضدانعقاد به میزان 15تا 20 میلی لیتر فرستاده شود.

• زمان رسیدن نمونه به آزمایشگاه کمتر از 12 ساعت باشد.

• نمونه آمنیون به منظور جلوگیری از آلودگی با DNA مادری نباید خونی باشد.

• آمنیوسنتز معمولا در هفته 15-18 بارداری انجام گیرد.

• نکته: امکان عدم رشد در نمونه های بالای 20 هفته بارداری افزایش می یابد.

• مایع آمنیون نباید کدر، سبز یا خونی باشد.

• نکته: ممکن است مایع آمنیون حاوی رسوبات سلولی باشد که اختلالی در مطالعه ایجاد نمی کند.

• در صورت تزریق آمپول رگام در پرونده ی بیمار ذکر شود.

 

معیارهای رد نمونه آمنیون

• اگر میزان نمونه کمتر از 10 میلی لیتر باشد مدت زمان کشت یا تهیه جواب افزایش یافته که در این صورت، فرصت لازم برای سقط قانونی کاهش می‌یابد. از طرفی امکان جواب ندادن نمونه هم وجود دارد که این مورد باید به بیمار گزارش داده شود.

• در صورت آلوده بودن نمونه، باید نمونه گیری مجدد انجام گیرد..

 

شرایط نگهداری نمونه آمنیون

• نمونه های گرفته شده بایستی سریعا به آزمایشگاه ژنتیک تحویل داده شود.

• در شرایط خاص می توان نمونه را تا 24 ساعت در یخچال نگهداری گردد (از یخ زدن و منجمد کردن نمونه جلوگیری شود).

اقدامات پس از نمونه گیری آمنیوسنتز و cvs

• بیماران ممکن است در ابتدا احساس ضعف و تهوع داشته باشد.

• در صورت ریزش مایع یا خون حتما به پزشک خود مراجعه نمایید.

• درد شدید شکمی برای چند ساعت

• تب ( درجه حرارت بالای 38 در جه سانتی گراد)

• برخی از پرشکان انجام فعالیت جنسی و ورزش را یک روز پس از عمل ممنوع می کنند. روز پس از عمل می تواند فعالیت طبیعی خود را دنبال کنند .

• زنان با گروه خون دارای RH منفی بایستی روگام تزریق کنند.

 

نمونه خون

نمونه خون مناسب نمونه ای می‌باشد که از رگ وریدی به مقدار 3 تا 5 میلی لیتر در شرایط مناسب توسط نمونه­گیر گرفته می شود.

 

حجم نمونه خون

• بزرگسالان: 5 میلی لیتر خون کامل

• نوزادان و کودکان: 1 تا 3 میلی لیتر خون کامل

• بیماری های x شکننده و آنمی فانکونی حداقل 4 میلی لیتر نمونه خون کامل

• جهت تعیین جنسیت: 5 میلی لیتر خون کامل در لوله های NIPT

 

معیارهای پذیرش نمونه خون

• نمونه خون لخته و همولیز نباشد.

• مشخصات ماده ضدانعقاد حتما روی لوله نوشته شده باشد

نکته: شرایط نمونه گیری جهت تعیین جنسیت: فرد نمونه گیر نباید اقا باشد و در زمان نمونه گیری از حضور اقا به اتاق نمونه گیری جلوگیری نمایید.

 

معیارهای رد نمونه خون

• نمونه های یخ زده قابل قبول نمی باشد.

• نمونه خون نباید در لوله های شیشه ای ریخته شود.

• در صورتی که نمونه خون لخته یا لیز باشد.

نمونه خون افرادی که جهت مطالعات سیتوژنتیک مناسب نمی باشد و در صورت انجام آزمایش، ممکن است جواب درستی دریافت نشود شامل:

• خانم های باردار که در آخر هفته بارداری می باشند.

• افراد معتاد

• خانم های بارداری که برای درمان سقط از هپارین تزریقی استفاده می کنند.

• افرادی که به طور مکرر به آنها خون و فرآورده های خونی تزریق می شود.

• BMT  (افرادی که پیوند مغز استخوان شده اند)

• افراد تحت شیمی درمانی و داروهای مهارکننده سیستم ایمنی

• افرادی که داروی آنتی بیوتیک مصرف نموده اند.

شرایط نگهداری نمونه خون

• نمونه باید در یخچال در دمای 4 درجه سانتی‌گراد نگهداری شود.

 

نمونه مغز استخوان  Bone Marrow(BM)

مغز استخوان یک بافت اسفنجی است که داخل استخوان های شما قرار دارد. مغز استخوان شامل یک قسمت مایع و یک قسمت جامد است. در آزمایش مغز استخوان از هر دو قسمت آن نمونه برداری می شود. برای آن که درک بهتری از موضوع داشته باشید، مغز استخوان را  اسفنج خیسی تصور کنید. پزشک می تواند هم از آب اسفنج نمونه‌برداری کند و هم تکه ای از  خود اسفنج را از آن جدا سازد. آزمایش مغز استخوان را نیز  می‌توان به همین ترتیب تصور نمود .

 

معیارهای پذیرش نمونه  BM

• میزان نمونه BM بستگی به توان متخصص یا کارشناس در گرفتن نمونه داشته و دارای محدودیت نمی باشد.

• نمونه های BM باید در فالکون یا فلاسک استریل فرستاده شود.

• نمونه های BM برای مطالعات سیتوژنتیک باید بیش از 10 درصد بلاست داشته باشد. وجود خرده های استخوان ممانعتی ایجاد نمی کند.

• نمونه نباید یخ زده باشد و باید در دمای اتاق منتقل گردد.

• نمونه BM برای آزمایشات مولکولی در لوله های EDTA ارسال می شود.

 

معیارهای رد نمونه BM

• نمونه های BM خشک شده فاقد ارزش مطالعه می‌باشد.

• نمونه BM نباید لخته یا لیز باشد.

• نمونه افراد تحت شیمی درمانی، پیوند مغز استخوان، مصرف داروهای مهارکننده تولید مغز استخوان و Revlimid،Imatinib، Thalomod فاقد ارزش مطالعه می باشد.

 

نمونه زگیل تناسلی HPV یا human papillomavirus

ویروس HPV یا human papillomavirus یا ویروس پاپیلومای انسانی ویروسی بسیار شایع در میان مردان و زنان است که باعث بروز بیماریهایی چون زگیل تناسلی می شود. این ویروس تقریبا دارای 100 تیپ می باشد که برخی تیپ های آن منجر به زگیل و برخی منجر به سرطان دهانه رحم می شود. برخی از این ویروس ها نیز باعث بروز زگیل در دست و پا و سایر نواحی بدن به غیر ناحیه تناسلی می شوند.

 

به سه دلیل ممکن است یک فردی مبتلا به ویروس HPV شده باشد ولی نتیجه آزمایش منفی باشد

• نمونه برداری صحیح انجام نشده باشد.

• آزمایش صحیح انجام نشده باشد.

• تعداد ویروسها هنوز اندک باشند. هر آزمایش یک سطح حساسیت دارد یعنی تا رسیدن به آن حساسیت آزمایش نمی تواند کارآئی داشته باشد. در بیماری زگیل تناسلی نیز تا ویروسها به تعداد مشخصی نرسند، تست مثبت نمی شود.

 

توصیه می شود افراد زیر اقدام به انجام آزمایش زگیل تناسلی بکنند

• افرادی که رابطه جنسی خارج از خانواده داشته اند.

• افرادی که شریک جنسی آنها رابطه جنسی خارج از خانواده داشته است.

• افرادی که شریک جنسی آنها دارای زگیل تناسلی در ناحیه تناسلی است.

• افرادی که خودشان دارای ضایعه مشکوک به زگیل تناسلی هستند.

 

معیارهای پذیرش نمونه HPV

آزمایش HPV به هیچ آمادگی خاصی نیاز ندارد. با این حال چون تست HPV و آزمایش پاپ اسمیر غالباً همزمان انجام می‌شود، بهتر است توصیه‌های زیر را برای دقیق‌تر ساختن هر دو آزمایش رعایت کرد:

• دو روز قبل از آزمایش، از رابطۀ جنسی، دوش گرفتن یا استفاده از داروهای واژینال یا فوم اسپرم‌کش، کرم یا ژله خودداری کنید.

• ترجیحاً تست را در طول عادت ماهانۀ خود برنامه‌ریزی نکنید؛ با این‌که تست قابل‌انجام است، اما در زمان دیگری در چرخه، پزشک می‌تواند نمونۀ بهتری از سلول‌ها جمع‌آوری کند.

 

مناطق نمونه برداری HPV در مردان

• سطح آلت تناسلی

• حفره حشفی یا حفره پوستی نزدیک به سر آلت

• ختنه گاه و یا همان پوست ختنه گاه

• کیسه بیضه

• ترشحات مجرا

• مایع منی

• ادرار

• پوست دور مقعد

• کانال مقعد

 

  مناطق نمونه برداری  HPV در  زنان

• آلت تناسلی

• دهانه رحم

• کشاله ران

 

معیارهای رد نمونه HPV

• نمونه گیری که با سواپ پنبه ای انجام شود.

• نمونه های که در ماده ای غیر از سرم فیزیولوژی انتقال پیدا کند.

• برداری‌های بزرگ تر از 5/0 سانتی‌متر

 

شرایط نگهداری نمونه HPV

• نمونه حتما در سرم فیزیولوژی قرار بگیرد.

• نمونه در یخچال نگهداری شود.

 

نمونه ادرار و مدفوع

معیار های پذیرش نمونه ادرار و مدفوع

• نمونه ادرار باید در ظرف تمیز دهان گشاد با قطر حداقل 5سانتی متر، با اندازه مناسب و غیر قابل نشت، جمع آوری گردد. بهتر است ظرف جمع آوری ادرار یک بار مصرف بوده و درغیر اینصورت عاری از هرگونه آلودگی با مواد شوینده باشد.

• جهت بررسیهای معمول و میکروبیولوژیک نمونه ادرار باید حداکثر تا دو ساعت پس از جمع آوری (در دمای اتاق) مورد بررسی قرار گیرد. پس از این مدت ترکیبات شیمیایی ادرار تغییر کرده و عناصر تشکیل دهنده آن شروع به تخریب می کنند

• دستوالعمل های جمع اوری ادرار تمیز جهت کشت (ویژه بانوان)

• پیش از انجام آزمایش از نوشیدن مقادیر زیاد آب و سایر مایعات اجتناب نمایید و توجه داشته باشید که بهترین نمونه برای تشخیص عفونت های ادراری نخستین نمونه ادرار صبحگاهی است.

• دستهای خود و چین های پوستی دستگاه تناسلی را کاملاً با آب و صابون شسته و به خوبی با دستمال کاغذی یک بار مصرف اطراف مقعد و پیشابرا را از جلو به عقب خشک کنید.

• درب ظرف ادرار را با احتیاط باز کنید، بدون آنکه دست شما با سطح داخلی ظرف ادرار یا درب آن تماس پیدا کند.

• با یک دست چین های پوستی دستگاه تناسلی را از هم باز کنید.

• پس از اینکه جریان ادرار شروع شد، قسمت اولیه ادرار (چند قطره اول) را دور ریخته و بقیه ادرار را با حجم 30میلیلیتر (تقریبا نصف ظرف) جمع کنید. توجه داشته باشید که ظرف مذکور تحت هیچ عنوان با پوست اطراف ناحیه تناسلی تماس پیدا نکند.

• درب ظرف را نمونه را بسته و آنرا به آزمایشگاه تحویل دهید

دستوالعمل های جمع اوری ادرار تمیز  جهت کشت (ویژه آقایان)

• پیش از انجام آزمایش از نوشیدن مقادیر زیاد آب و سایر مایعات اجتناب نمایید وتوجه داشته باشید که بهترین نمونه برای تشخیص عفونت های ادراری نخستین نمونه ادرار صبحگاهی است.

• دستهای خود و سر آلت را کاملاً با آب و صابون شسته و به خوبی با دستمال کاغذی خشک کنید.

• درب ظرف ادرار را با احتیاط باز کنید بدون آنکه دستهای شما یا سر آلت با سطح داخلی ظرف یا درب آن تماس پیدا کند.

• مقدار کمی از قسمت اول ادرار (چند قطره اول) را به داخل توالت تخلیه کرده و حدود 30 میلیلیتر (حدود نصف ظرف نمونه) از آن را جمع آوری نمایید.

• درب ظرف نمونه را بسته و آن را تحویل آزمایشگاه دهید. 

دستوالعمل های جمع اوری ادرار تمیز جهت  کشت(ویژه اطفال)

• محل خروج ادرار کاملا با آب و صابون شسته شود . سپس کاملا با آب معمولی شستشو دهید. چنانچه کودک را حمام برده و سپس این کار را انجام دهید بهتر است . همچنین در هنگام خواب راحت تر می توان به طفل کیسه وصل نمود.

• کیسه ادراری متناسب با جنس کودک تهیه کنید.

• هر کیسه ادراری حداکثر 45 دقیقه می تواند به مجرای خروجی ادرار متصل باشد .

• حدود 10 الی 15 سی سی ادرار که در کیسه جمع شد سر آن را تا کرده تا بسته شود و سریع به آزمایشگاه بیاورید و چنانچه به آزمایشگاه دسترسی نداشتید آن را در یخچال قرار داده و حداکثر 6 ساعت بعد به آزمایشگاه بیاورید .

• لطفا فراموش نشود ، کیسه ادراری دارای برچسب نام بیمار و نوع آزمایش باشد . 

• در نمونه گیری مدفوع، بیمار نباید از 15 روز قبل از نمونه­گیری آنتی­بیوتیک (نظیر تتراسایکلین و سولفانامید)، داروهای ضد تکیاخته، بیسموت، سولفات باریم، ترکیبات کائولین، روغن کرچک، هیدروکسید منیزیم یا هرگونه داروی ملین مصرف کرده باشد.

• در یک روز بیش از یک نوبت نمونه از بیمار گرفته نشود.

• نمونه­گیری مدفوع در بیمارانی که بیش از سه روز بستری شده­اند توصیه نمی­شود.

• نمونه مدفوع نباید با ادرار یا آب آلوده شود.

• 2 تا 3 روز قبل از آزمایش، رژیم غذایی فاقد سبزیجات خام (مخصوصا شلغم و تربچه)، گوشت قرمز، گوشت سفید (مرغ و ماهی) رعایت شود.

معیار های رد نمونه ادرار و مدفوع

ادرار

• تحویل نمونه های آنالیز و کشت ادرار که بیش از 2 ساعت از جمع آوری آنها می گذرد و در یخچال نگهدارنشده اند

• نمونه های ادرار کمتر از 10 سی سی

• نمونه هایی که از کیسه ادراری جمع آوری شده اند

مدفوع

• تحویل نمونه های مدفوع که بیش از دو ساعت از نمونه گیری می گذرد و در یخچال نگهداری نشده اند.

• خشک شدن نمونه

 

پاپ اسمیر

پاپ اسمیر یا تست پاپ، فرآیندی است که در طی آن سرطان دهانه رحم در بانوان، بررسی می شود. پاپ اسمیر از طریق جمع آوری سلول های گردن رحم، که قسمت پایین و انتهای باریک رحم و در بالای واژن قرار دارد، انجام می شود.

تشخیص سرطان دهانه رحم از طریق پاپ اسمیر شانس درمان آن را بالاتر می برد و علاوه بر آن، پاپ اسمیر وجود سلول هایی که می توانند در آینده باعث سرطان شوند را نیز تشخیص می دهد. تشخیص این سلول های غیر طبیعی از طریق پاپ اسمیر، اولین قدم در متوقف کردن رشد احتمالی سرطان دهانه رحم است.

 

 

چه کسانی در معرض خطر هستند و باید حتما تست پاپ اسمیر انجام دهند؟

اگر شما فاکتورهای خطر مشخصی دارید، بدون توجه به سنتان، پزشک احتمالا پاپ اسمیر بیشتری را توصیه می کنند. این فاکتورهای خطرناک به این شرح می باشند:

• تشخیص سرطان دهانه رحم یا پاپ اسمیری که سلول های پیش سرطان را نشان داده است.

• قرار گرفتن در معرض دی اتیل استیل بسترول، قبل از تولد.

• عفونت اچ آی وی

• سیستم ایمنی ضعیف به دلیل پیوند عضو، شیمی درمانی یا استفاده دائم کورتیکواستروئید

• سابقه سیگار کشیدن

 

معیارهای پذیرش نمونه پاپ اسمیر

• در طی دو روز قبل از انجام تست پاپ اسمیر (تست سرطان دهانه رحم) از ژل، کرم و داروهای واژینال استفاده نشود

• تست پاپ اسمیر (تست سرطان دهانه رحم) نباید در زمان خونریزی پریود انجام شود.

• تا ۲۴ ساعت قبل تماس جنسی نداشته باشد.

• بهتر است این تست در فاصله روزهای ۱۸-۱۲ سیکل قاعدگی انجام شود.

• انجام تست پاپ اسمیر در ۳ماهه اول حاملگی بلامانع است.در حاملگی دو هفته بعد از اولین روز آخرین قاعدگی(روز ۱۸-۱۶ سیکل)بهترین زمان برای گرفتن پاپ اسمیر است.

• انجام تست  پاپ اسمیر باید حداقل ۸هفته بعد از زایمان باشد.

• انجام تست پاپ اسمیر مجدد باید با فاصله زمانی بیشتر از ۸هفته از نمونه گیری قبلی باشد.

 

معیارهای رد نمونه پاپ اسمیر

• در شرایطی که آماده کردن نمونه بیش از اندازه طول بکشد و نمونه خشک شود.

• نمونه برداشته شده باید به خوبی روی لام کشیده شود و فیکساتور از فاصله ۲۰ سانتی متری روی نمونه زده شود، در صورتی که این فاصله کم باشد، سلول ها از روی نمونه می پرند و خطای تست پاپ اسمیر زیاد می شود

• نمونه های که حاوی پرز های سواپ باشد. در این صورت بهترین وسیله جهت نمونه گیری براش می باشد.

 

• ردیف	نمونه کنترلی	معیار پذیرش	دلایل عدم پذیرش
  1	سرم یا لخته خون	لیپمی نباشد مقدار کافی باشد با توجه به نوع آزمایش زنجیره سرد رعایت شود.	عدم رعایت شرایط آزمایش(رژیم غذایی) قبل از نمونه برداری نمونه های شدیدا همولیز و کدر/ استفاده از لوله نامناسب ناخوانا بودن برچسب یا نبود آن
  2	CBC	لخته نباشد مقدار کافی باشد لیز نباشد	وجود لخته یا همولیز حجم ناکافی
  3	ادرار	مقدار کافی باشد نمونه های کشت حتماوسط ادرار /رعایت الزامات شرایط نگهداری وانتقال به آزمایشگاه(دما،فاصله زمانی ومحل نگهداری)	حجم ناکافی/مخلوط شدن نمونه با مدفوع رشد بیش از حد باکتری مصرف آنتی بیوتیک از3روز قبل تاکنون و عدم رعایت بهداشت درنمونه گیریU/C
  4	مدفوع	نباید با ادرار ،دستمال کاغذی،صابون یا آب مخلوط شود	مصرف برخی داروها(مترونیدازول، تتراسیکلین) استفاده از شیاف تاخیر در ارسال نمونه به آزمایشگاه
  5	سدیمان و تست های انعقادی	لخته نباشد مقدار صحیح باشد لوله متناسب باشد لیز نباشد مدت پایداری نمونه رعایت شده باشد	لخته باشد مقدار صحیح نباشد لوله متناسب نباشد لیز باشد مدت پایداری نمونه رعایت نشده باشد